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叔丁醇被大家认为是适合制剂的冻干溶剂。有如下特点：凝固点高，纯的叔丁醇在室温下（25℃）就可以冻结。叔丁醇的蒸汽压较高有利于升华，节省冻干时间。叔丁醇毒性低，在冻干过程中，大部分叔丁醇可在一次干燥阶段升华，在制剂中残留量很低。叔丁醇自身在冻结中形成针状结晶，能改变溶质的结晶方式，利于升华。叔丁醇也可在荧光PCR试剂当冻干保护剂使用。叔丁醇起到加快冻干进程和改善冻干微观结构的作用。冻干前的荧光PCR反应混合物原液中的浓度范围为：叔丁醇的浓度为10%-40%（v/v）。荧光PCR...
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荧光PCR冻干体系筛选范围:糖类、醇类、氨基酸类、聚合物类、大分子蛋白、无机盐类等，其组分为其中的几种的组合。优化方法：没有经验采用单一因素法，有一定经验的采用多因素法。单一因素法筛选出保护效果比较好的保护剂，再将保护效果好的保护剂进行组合，产生终配方。因此，初步筛选采用单因素法，进一步筛选采用多因素法。我们不但能提供适合荧光PCR冻干的试剂冻干机Pilot10-15T，还能为用户提供对药品、诊断试剂、蛋白、多肽、酶、抗体、抗原等进行冻干工艺优化，包括保护剂优化、冻干曲线优化...
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实时荧光定量PCR技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，成为核酸分子定量的标准方法。在做荧光定量PCR实验时建议使用这些耗材：96孔光学反应板配合光学膜，0.2ml光学八联反应管配合光学膜，0.2ml光学八联反应管配合平盖的光学八联管盖等。在做荧光定量PCR实验时有一些好的方法分享给大家，例如在使用单管或者8连管做实验时，如果在样本数量不多的时候，建议在样品加热块（TRAY）上对称的安放样品，并且先放在第6列或者第7列...
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实时定量PCR不仅操作简便、快速高效，而且具有很高的敏感性和特异性。广泛地运用于分子生物学的各个领域。实时定量PCR在应用中有一些使用人对定量的方法上觉得存在着不容易克服的问题主要包括1.定量的方法与众多因素有关，如水、缓冲液、仪器性能等，乃至于核酸的抽提过程都会影响到结果的稳定性。2.标准品的稳定保存很难获得成功，高浓度的核酸物质易于被降解，而每次配制新的标准品又会增加批间差异。3.每次测定样本都要同时测定标准品，而热循环仪的样本孔有限，所以在单批内不能测定更多的样本，这样...
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冻干荧光PCR试剂冻干方法是将荧光PCR试剂经过预冻，在真空状态下进行升华，后可制备成冻干粉。冻干荧光PCR试剂时，选用的反应管在做冻干时有许多不足之处：1.由于反应管呈上宽下窄的锥字形，还需要借助其他工具支撑，这样反应管试剂与冻干机搁板的接触面积很小，升华时传热会受到限制，延长了预冻和升华的时间，反应管中的冻干程序一般在24～30小时，冻干制品日产量很低。2.反应管中的冻干，在加入冻干混合试剂后，需要进行离心处理，排出气泡，并将粘附在反应管壁上的试剂离心下来。3.反应管中的...
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荧光定量PCR的效率值可通过标准曲线获取。理想的反应效率为100%。效率较高（高于110%）一般说明反应过程中存在抑制作用。引起抑制作用的原因主要是RAN或者DNA质量较差，模板浓度过高及含有核酸钝化的残余物。反应效率较低（低于90%）的原因有试剂浓度不适（主要是引物、镁、Taq、DNA、聚合酶、尤其是在多重试验中）。造成效率低的其他因素有引物Tm之间的差异超过5℃或者是热循环条件不适。抑制作用和较低的效率会影响分析的灵敏度，导致动态范围减小及通用性降低。怎样解决呢？可在做冻...
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荧光PCR冻干芯片的制备方法简单快速，易于操作，缩短冻干所需时间，一般可在八小时内完成冻干步骤。荧光PCR冻干芯片的制备方法示例,1.先要称取制备冻干保护剂如海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油、焦磷酸二乙酯处理过的水，置于容器中混合均匀，然后加热至*溶解，在放入2～8℃冷却。2.预混荧光定量PCR试剂如将PCR反应缓冲液、引物、探针、dNTPs和DNA聚合酶混合均匀；将预混的荧光定量PCR试剂和冻干保护剂混合均匀（体积比为3:1），制备成冻干试剂；取5～8μL的冻干试剂点在微流控...
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冻干对荧光探针和荧光染料有防护作用，冻干可防止探针和染料降解，提高反应的灵敏度和特异性。接着介绍一下荧光探针和荧光染料的特性。荧光探针是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。荧光染料是在PCR反应体系中，加入...
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